产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
支原体检测试剂盒(探针法) | G1903-50 | 50 rxns |
G1903-100 | 100 rxns |
产品简介
本产品是基于Taqman探针法检测细胞培养等生物材料中的常见的8种支原体污染，具有操作简单、灵敏度高、特异性强等特点。可检测的样本是接种后进行3-6天细胞培养的上清，如果样本是细胞悬浊液或者有qPCR抑制剂存在，需要提取DNA后，再进行反应。本试剂盒还提供了Positive Control，如果不确定样本是否含有qPCR抑制剂，可在qPCR反应前向样本中加入Positive Control，进行正对照反应，防止假阴性结果产生。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；-20℃避光保存，12个月有效期。
组成
Component Number | Component | G1903-50 | G1903-100 |
G1903-1 | 2×Myco Universal Blue qPCR Master Mix | 500 µL | 1 mL |
G1903-2 | Myco Primers & Probe Mix | 60 µL | 120 µL |
G1903-3 | Positive Control | 50 µL | 100 µL |
说明书 | 1份 |
实验前准备
1. Real Time PCR扩增仪。
2. 实验专用qPCR反应管或反应板。
操作步骤
1. 待测样本准备；
贴壁细胞：如果使用常用的细胞培养液，细胞接种或换液3天以上时，可直接取1 µL的培养基上清加入到qPCR反应体系中。
悬浮细胞：需要提取DNA，再进行qPCR反应。
反应抑制剂：如果细胞培养液中存在qPCR抑制剂，需要提取DNA，再进行qPCR反应。
2. 建议qPCR反应体系；
Component | 20 μL rxn |
2×Myco Universal Blue qPCR Master Mixa | 10 μL |
Myco Primer & Probe Mix | 1.2 μL |
Samplab | 1 μL |
Nuclease-Free Water | Add to 20 μL |
a.qPCR Master Mix中不含ROX参比染料，在设置qPCR程序时，将ROX通道选为None；如果需要添加ROX参比染料，请购买50×ROX Reference Dye，使用时终浓度为1×。
b.如果不确定样本中是否含有qPCR抑制剂，向qPCR反应体系中加入样本的同时再加入0.5 µL的Positive Control；如果需要Negative Control，样本可以用Nuclease-Free Water代替或者不加任何模板。
3. qPCR反应程序（可根据机型适当调整）；
A. 两步法 | B. 三步法 |
阶段 | 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 阶段 | 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 |
Stage 1 | 预变性 | 1 | 95℃ | 30 sec | Stage 1 | 预变性 | 1 | 95℃ | 30 sec |
Stage 2 | 变性 | 40 | 95℃ | 15 sec | Stage 2 | 变性 | 40 | 95℃ | 15 sec |
退火/延伸 | 60℃ | 30 seca | 退火 | 55-65℃ | 10 sec |
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| 延伸 | 72℃ | 30 seca |
*需提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度；需提高扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间。
4. qPCR反应参数。
选择报告荧光基团为FAM，淬灭荧光基团为None。
注意事项
1. 试剂解冻后请上下轻轻颠倒混匀后再使用，请勿涡旋振荡混匀，避免产生气泡。
2. 配制反应液时，试剂请于冰上放置。
3. 反应液的配制、分装请使用新的一次性枪头、尽量避免样品间的污染。
4. 避免反复冻融，解冻后尽量在一个月内使用完毕。
适配机型
ABI: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900 HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500/7500 Fast, ViiA 7™, QuantStudio™ 系列, PikoRealTM Cycler;
Stratagene: Mx3000P®, 3005P™, 4000™;
Bio-Rad: CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ5™, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™;
Eppendorf: Realplex 2s, Mastercycler® ep, realplex;
IIIumina: Eco QPCR
Cepheid: SmartCycler®
Qiagen Corbett: Rotor-Gene® 系列
Roche: LightCycler™ 系列
Takara: Thermal Cycler Dice系列
Analytikjena: qTOWER系列
qTOWER系列: LineGene系列
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
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