| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
|---|---|---|
| 灵敏ECL化学发光试剂盒（皮克级） | BKM-0383 | （超敏 飞克级）25 mL×2 |
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
灵敏ECL化学发光试剂盒（皮克级） | G2074-50ML | 2×25 mL |
G2074-100ML | 2×50 mL | |
G2074-500ML | 2×250 mL |
产品简介
本产品是一种灵敏度较高的化学发光试剂盒，基本原理是以luminol为基础的化学发光；可与二抗上偶联的辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase, HRP）发生反应而发光，通过X-光胶片曝光或其他成像方法（如荧光或化学发光成像仪）进行检测；低浓度样本依然能够检测信号，节省样本；低浓度抗体（一抗、二抗）孵育之后依然能够检测到信号，节省珍贵的抗体；相较于普通ECL化学发光试剂盒（G2014），信号值至少增强10倍。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；2-8℃避光保存，有效期12个月。
组成
Component Number | Component | G2074-50ML | G2074-100ML | G2074-500ML |
G2074-1 | 灵敏ECL A液 | 25 mL | 50 mL | 250 mL |
G2074-2 | 灵敏ECL B液 | 25 mL | 50 mL | 250 mL |
说明书 | 1份 | |||
操作步骤
1. 将ECL A液和ECL B液等体积混合制成ECL工作液，室温配制，现配现用；
2. Western Blot实验中PVDF膜（或NC膜）经二抗孵育后，多次洗涤，滤纸吸去多余液体；将膜放在两片洁净保鲜膜（或PE手套）中间，加入ECL工作液覆盖膜表面，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡；
3. 充分反应之后，用滤纸或吸水纸吸去多余的ECL工作液，随后进行压片检测或是荧光成像仪检测；
4. 压完的胶片用显影、定影试剂（推荐G2019、G2023、G2024）进行显影和定影（若为荧光成像仪曝光忽略此步骤）；根据发光强度调整曝光条件。
注意事项
1. ECL A液和B液吸液过程中务必更换枪头，避免A液、B液交叉污染，致使活性成分失效。
2. 在与膜发生接触过程中，请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材，避免外源蛋白质及金属离子污染。
3. 叠氮化钠会抑制HRP的活性，所有相关试剂应避免使用。
4. ECL工作液配置完成后请于一天内使用完，请勿留置到第二天，以免影响实验结果的准确性。
5. 各溶液使用后，请盖紧瓶盖避光保存，以防失效；特别是B液，含有氧化剂，容易被还原而失效。
6. ECL化学发光试剂盒选择参照附表一，一抗及二抗推荐稀释比测试数据均来自研抗体。
7. ECL化学发光检测常见问题及解决方案参照附表二。
8. ECL化学发光试剂盒A/B液均对人体有害，操作时务必小心，注意有效防护，避免直接接触人体或吸入呼吸道。
9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
附表一：ECL化学发光试剂盒选择参照表
产品名称 | 普通ECL化学发光试剂盒 | 灵敏ECL化学发光试剂盒 | 超敏ECL化学发光试剂盒 |
货号 | G2074 | G2020 | |
检测极限 | 纳克级 | 皮克级 | 飞克级 |
一抗推荐稀释比（1 mg/mL储存液） | 1:1000-1:5000 | 1:4000-1:10000 | 1:10000-30000 |
二抗推荐稀释比（1 mg/mL储存液） | 1:1000-1:6000 | 1:3000-1:60000 | 1:6000-150000 |
特点及适用性 | 宽范围，适用性广 | 宽范围，适用性广，灵敏度高，中丰度蛋白，节省抗体 | 极高灵敏度，低丰度蛋白，抗体效价低或比较珍贵 |
附表二：ECL化学发光检测常见问题及解决方案
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
高背景（背景较高或无特异性条带） | 一抗、二抗稀释没有使用正确的缓冲液和浓度 | 适当降低稀释比，降低一抗、二抗的浓度 |
封闭液使用不正确或封闭不充分 | 磷酸化蛋白检测务必使用BSA或无蛋白封闭液封闭；膜孔径越小，封闭及洗脱时间应越长 | |
一抗孵育不充分 | 适当延长孵育时间（4℃孵育过夜） | |
信号弱 | 一抗、二抗使用浓度偏低 | 提高一抗、二抗使用浓度 |
蛋白丰度低 | 增加上样体积 | |
| 换用灵敏度更高的ECL化学发光试剂盒 | ||
荧光迅速猝灭，出现空心条带（鬼带） | 目的条带荧光过强，快速消耗发光底物，底物消耗完之后就会出现反白的情况 | 降低蛋白上样量或一抗、二抗的用量 |
膜上出现棕色或黄色条带 | 目标区域HRP酶含量过于丰富，产生大量自由基，致使HRP酶氧化失活 | 降低蛋白上样量或一抗、二抗的用量 |
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
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