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ECL发光液组合装
BKM-0421
百科盟

产品信息

产品名称 产品编号 规格
ECL发光液组合装 BKM-0421 (超敏 飞克级)25 mL×2

产品简介

产品信息

产品名称

产品编号

规格

ECL发光液组合装

G2161-200ML

普通ECL发光液:2×50 mL

灵敏ECL发光液:2×25 mL

超敏ECL发光液:2×25 mL


产品简介

本产品是由普通ECL发光液、灵敏ECL发光液、超敏ECL发光液三种不同灵敏度的ECL发光液组成。ECL发光液基本原理是以luminol为基础的化学发光;可与二抗上偶联的辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)发生反应而发光,通过X-光胶片曝光或其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测;检测极限分别为纳克级、皮克级、飞克级,可满足不同目的蛋白的曝光实验需求。灵敏以及超敏ECL发光液在样本浓度较低时依然能够检测信号,节省样本;同样低浓度抗体(一抗、二抗)孵育之后依然能够检测到信号,节省珍贵的抗体;灵敏ECL发光液相较于普通ECL发光液,信号值至少增强10倍;超敏ECL发光液相较于灵敏ECL发光液,信号值至少增强10倍。


储存与运输

冰袋(wet ice)运输;2-8℃避光保存,有效期12个月。


组成

Component Number

Component

G2161-200ML


G2161-1

普通ECL发光液

普通ECL A液

50 mL

G2161-2

普通ECL B液

50 mL

G2161-3

灵敏ECL发光液

灵敏ECL A液

25 mL

G2161-4

灵敏ECL B液

25 mL

G2161-5

超敏ECL发光液

超敏ECL A液

25 mL

G2161-6

超敏ECL B液

25 mL

说明书

1份


操作步骤

1. 将相同灵敏度的ECL A液和ECL B液等体积混合制成相应灵敏度的ECL工作液,室温配制,现配现用;

2. Western Blot实验中PVDF膜(或NC膜)经二抗孵育后,多次洗涤,滤纸吸去多余液体;将膜放在两片洁净保鲜膜(或PE手套)中间,加入ECL工作液覆盖膜表面,此过程应小心完成,避免保鲜膜与PVDF膜(或NC膜)之间产生气泡;

3. 充分反应之后,用滤纸或吸水纸吸去多余的ECL工作液,随后进行压片检测或是荧光成像仪检测;

4. 压完的胶片用显影、定影试剂(推荐G2019G2023G2024)进行显影和定影(若为荧光成像仪曝光忽略此步骤);根据发光强度调整曝光条件。


注意事项

1. ECL A液和B液吸液过程中务必更换枪头,避免A液、B液交叉污染,致使活性成分失效。

2. 在与膜发生接触过程中,请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材,避免外源蛋白质及金属离子污染。

3. 叠氮化钠会抑制HRP的活性,所有相关试剂应避免使用。

4. ECL工作液配置完成后请于一天内使用完,请勿留置到第二天,以免影响实验结果的准确性。

5. 各溶液使用后,请盖紧瓶盖避光保存,以防失效;特别是B液,含有氧化剂,容易被还原而失效。

6. ECL化学发光试剂盒选择参照附表一,一抗及二抗推荐稀释比测试数据均来自自研抗体。

7. ECL化学发光检测常见问题及解决方案参照附表二。

8. ECL化学发光试剂盒A/B液均对人体有害,操作时务必小心,注意有效防护,避免直接接触人体或吸入呼吸道。

9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


附表一:ECL化学发光试剂盒选择参照表

产品名称

普通ECL化学发光试剂盒

灵敏ECL化学发光试剂盒

超敏ECL化学发光试剂盒

目录号

G2014

G2074

G2020

检测极限

纳克级

皮克级

飞克级

一抗推荐稀释比

(1 mg/mL储存液)

1:1000-1:5000

1:4000-1:10000

1:10000-30000

二抗推荐稀释比

(1 mg/mL储存液)

1:1000-1:6000

1:3000-1:60000

1:6000-150000

特点及适用性

宽范围,适用性广

宽范围,适用性广,灵敏度高,中丰度蛋白,节省抗体

极高灵敏度,低丰度蛋白,抗体效价低或比较珍贵

附表二:ECL化学发光检测常见问题及解决方案

常见问题

可能原因

解决方法

高背景(背景较高或无特异性条带)

一抗、二抗稀释没有使用正确的缓冲液和浓度

适当降低稀释比,降低一抗、二抗的浓度

封闭液使用不正确或封闭不充分

磷酸化蛋白检测务必使用BSA或无蛋白封闭液封闭;膜孔径越小,封闭及洗脱时间应越长

一抗孵育不充分

适当延长孵育时间(4℃孵育过夜)

信号弱

一抗、二抗使用浓度偏低

提高一抗、二抗使用浓度

蛋白丰度低

增加上样体积

换用灵敏度更高的ECL化学发光试剂盒

荧光迅速猝灭,出现空心条带(鬼带)

目的条带荧光过强,快速消耗发光底物,底物消耗完之后就会出现反白的情况

降低蛋白上样量或一抗、二抗的用量

膜上出现棕色或黄色条带

目标区域HRP酶含量过于丰富,产生大量自由基,致使HRP酶氧化失活

降低蛋白上样量或一抗、二抗的用量


本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!



(产品包装升级中,以实物为准。


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