| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
|---|---|---|
| 2 x Universal Ligation Mix | BKM-0506 | （零背景Topo克隆）25 T |
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
2×Universal Ligation Mix | G3341-50 | 50T |
G3341-100 | 100T |
产品描述
2×Universal Ligation Mix是含有T4 DNA Ligase和反应buffer的即用型2×预混液，内含的T4 DNA Ligase可催化粘性末段或平末端双链DNA或RNA的5'-P末端和3'-OH末端之间以磷酸二酯键结合，同时可以修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交链中的单链切口。优化的预混反应缓冲液使反应更加高效，操作更便捷，25℃反应5 min后反应体系即可转化多种化学感受态细胞。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效。
组成
Component | G3341-50 | G3341-100 |
2×Universal Ligation Mix | 250 μL | 2×250 μL |
连接体系（推荐10 μL反应体系）
Component | Volume |
2×Universal Ligation Mix | 5 μL |
Vector | X μL |
DNA segment | Y μL |
Nuclease-Free Water | Add To 10 μL |
连接反应条件
粘性末端25℃连接反应5-30分钟，平末端25℃连接反应不超过2小时或4℃过夜反应。
连接产物转化
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞(如E.coli DH5α、E.coli Top10等)放置冰上解冻；
2. 将反应后的样品加入到感受态中，手指轻轻拨动管底混匀，冰浴30 min；
3. 然后产物放置于42℃水浴锅热激90 s，结束后，迅速置于冰上，冰浴2-5 min；
4. 取900 μL无菌的SOC或LB培养基加入EP管中，混匀后，将EP管置于摇床上，220 rpm，37℃培养1 h复苏细菌（也可置于37℃培养箱静置培养1 h）；
5. 根据实验需求，吸取不同体积已转化感受态细胞加到含有相应抗生素的LB固体培养基上，将细胞均匀涂布开，待液体完全吸收后将平板倒置于37℃培养箱，过夜培养。
阳性克隆鉴定
挑取平板的上生长出来的单克隆菌落进行菌落PCR鉴定、或经培养后提取质粒酶切或PCR鉴定、或将提取的质粒直接测序分析鉴定。
注意事项
1. 配置反应体系时建议在冰上进行。
2. 载体和目的片段务必进行凝胶纯化并电泳检测其质量和浓度，浓度低时可以不加水，直接用其补足。当载体和插入片段总体积大于5 μL时，可将反应体系放大至20 μL。
3. 建议载体与插入片段摩尔比1:3~1:10。
4. 当使用电穿孔法转化时，连接产物需经柱式法或乙醇沉淀法等纯化DNA。
5. 2×Universal Ligation Mix建议使用时取出，用完后立即放回-20℃，解冻后可分装冻存以减少反复冻融次数。
6. 平末端载体与DNA片段进行连接时，需先将载体去磷酸化（推荐G3400）处理，以防止其自身环化。
7. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。
本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
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