产品信息

产品简介

Poly(A) Polymerase，也称Poly(A)加尾酶，来源于大肠杆菌，以不依赖于模板的方式催化由ATP转化成的AMP添加到单链RNA的3’末端，以形成Poly(A)尾。Poly(A) Polymerase的加尾效率很高，可以在RNA的3'末端加入20~200个A碱基。主要用途：RNA末端标记、mRNA体外合成等。

来源：来源于大肠杆菌由大肠杆菌重组表达。

酶活定义：在37℃、pH 8.0条件下，10分钟内使1 nmol AMP掺入RNA末端所需的酶量定义为1个酶活单位。

纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度＞95%；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；5 U/μL。

失活或抑制：EDTA至浓度为10 nM或65℃加热20min失活。

酶存储buffer：20 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1% Triton X-100，50%Glycerol，pH 7.5。

10хPAP Reaction buffer：500 mM Tris-HCl，2.5 mM NaCl，100 mM MgCl₂，pH 8.0。

图1. 300 nt单链RNA底物加poly(A)尾效果图。20 μL反应体系，0.5 μg单链RNA (300 nt)，加入不同量Poly(A) RNA Polymerase，37℃孵育30 min，接着65℃孵育20 min终止反应。（由图中可以看出5 U  Poly(A) RNA Polymerase 反应30 min可以在RNA的3'末端加尾约100 nt。RNA marker 1000货号G3371，RNA marker 6000货号G3372）

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。

组成

操作步骤

1. 参考下表配置反应体系：

2. 将反应体系于37℃孵育30 min。加入EDTA至终浓度10 mM或65℃加热20 min以终止反应。（注：用于加尾反应的RNA应该进行适当纯化。）

注意事项

1. 涉及RNA操作，需要严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要经过DEPC处理以去除RNase或者确保是RNase free的。

2. 该酶也可以使用M-MuLV逆转录酶反应缓冲液进行反应，反应需要有Mg²⁺等二价阳离子才能发挥活性。

3. RNA加的A尾长度受酶量、ATP浓度和反应时间等因素影响，不同的实验需要加A的量会有所不同，可通过减少反应时间来调整加A的长度，该酶在37℃反应30 min时可加约30个A碱基，1 h可加约100个A碱基。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

版本号：V1.0-202203

（产品包装升级中，以实物为准。）