| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
|---|---|---|
| SweFast Cut XbaI | BKM-0602 | （DpnII）100 T |
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
SweFast Cut XbaI | G3515-100T | 100 T |
产品简介
SweFast Cut XbaI来源于大肠杆菌重组表达的携带有克隆自巴氏黄单胞菌(Xanthomonas badrii)的XbaI基因，可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶，适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。
产品组成
Component Number | Component | G3515-100T |
G3515 | SweFast Cut XbaI | 100 μL |
G3500 | 10×SweFast Cut Buffer | 1 mL |
说明书 | 1份 | |
酶活定义：在37°C条件下，20 μL反应体系中，1 μL酶能够在15 min内完全消化1 μg λDNA（dam-/HindIII digest）所需的酶。
识别位点：5'-T↓CTAGA-3'
3'-AGATC↑T-5'
反应条件：1×SweFast Cut Buffer；最适37°C孵育。
存储液组成为：10 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 200 µg/ml BSA, pH 7.4 @ 25°C
10×SweFast Cut Buffer组成：500 mM Potassium Acetate, 200 mM Tris Acetate, 100 mM Magnesium Acetate, 1000 µg/ml BSA, pH 7.9 @ 25°C
热失活条件：65°C孵育20 min。
储存与运输
冰袋运输；-20°C保存，有效期2年, 可以适当分装后-80°C冻存延长保存时间。
注意事项
1. 3 h 孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
质量控制
1. 功能活性检测：最适反应温度下20 μL反应体系中，1 μL酶能够在15 min内完全消化1 μg λDNA。
2. 超长时间孵育检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg λDNA共孵育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，但延长孵育时间可能出现星号活性。
3. 酶切-连接-再酶切检测：最适反应温度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切产物，在16°C下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
4. 非特异性内切酶活性检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg超螺旋质粒DNA共同孵育4 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒 DNA仍然处于超螺旋状态。
5. 蓝白斑检测：将含有单一lacZα基因的载体以1 μL酶消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落，而连接错误（即DNA末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对于SweFast Cut系列限制酶而言，白色菌落比例应小于1%。
使用说明
1. DNA 快速酶单酶切推荐体系
Component | 质粒DNA | PCR 产物a | 基因组 DNA |
Nuclease-free water | Variable | Variable | Variable |
10×SweFast Cut Buffer | 2 μL | 3 μL | 5 μL |
底物DNA | ≤1 μg | ≤0.2 μg | ≤5.0 μg |
SweFast Cut XbaI | 1 μL | 1 μL | 5 μL |
Total volume | 20 μL | 30 μL | 50 μL |
1) 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：a本体系适用于经过纯化的PCR 产物酶切；
2) 使用前请将10×SweFast Cut Buffer混匀；
3) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心；
4) 37℃温育5-15 min（质粒），或15~30 min（PCR产物），或30~60 min（基因组DNA），不同的DNA由于其结构不同会导致酶切效果不同，因此可根据酶切效果调整反应时间。
5) 酶切不完全或者酶切2 μg以上的DNA时，可以适当增加酶量，但总酶量不得超过总反应体系的1/10。
6) 80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应（可选）。
7) 如果总反应体系大于20 μL，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
2. 双酶切或多酶切推荐体系
1) 每种快速内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系；
2) 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10, 反应体系中甘油的浓度应<5%以避免星号活性。例如：50 μL反应体系中总酶量不超过5 μL。
3) 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，热失活第一种酶后再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
4) 在推荐反应温度、时间下孵育，双酶切反应不建议孵育过夜。
甲基化修饰影响
Dam：序列可能重叠剪切受阻；
Dcm：甲基化不影响；
CpG：甲基化不影响；
EcoBI：甲基化不影响；
EcokI：甲基化不影响。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
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