服务介绍：

　　机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。如：醛基(丙二醛MDA)、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试 MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度，通过SOD与MDA的结果分析有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。

实验结果展示：

　　1、丙二醛 MDA

实验流程：

1. 检测准备工作：

1.1. MDA探针工作液配制：将MDA检测探针用5mL超纯水煮沸充分溶解；并加入与超纯水等体积的5 mL冰醋酸（自备）混匀，配制成MDA探针工作液（4℃可保存一个月）；

1.2. MDA检测工作液配制：根据所测样品数（含标准品），参考下表合理配制；

1.3. MDA标准品配制：根据需要，使用PBS或超纯水将MDA标准品（200 μM）梯度稀释（例如吸光度法可设置50/25/12.5/6.25/3.125 μmol/L；荧光强度法可设置10/8/6/4/2 μmol/L），与待测样品进行后续检测后，用于标准曲线法数据分析；或适当地稀释成一个已知浓度的标准品，与待测样品进行后续检测后，用于标准品换算法数据分析；

2. MDA检测：

2.1. 根据下表将样品和MDA检测工作液充分混合；

2.2. 在95℃条件下，孵育40 min；

2.3. 孵育结束后，立即冰浴5 min；

2.4. 冰浴结束后，10000 g 离心10 min，取200 μL上清于透明96孔板中，使用酶标仪检测532 nm处吸光度；或取200 μL于黑色96孔板中，使用酶标仪检测荧光强度（Ex 532/Em 553）；建议优先吸光度法进行检测，当样品浓度过低，例如：1 μmol/L以下，可使用荧光强度法进行检测。

3. 数据分析：

数据分析前，需计算待测组织或细胞样品蛋白浓度。可通过BCA蛋白定量检测试剂盒（G2026）对待测样品进行蛋白浓度检测。

3.1. 标准曲线法：

3.1.1. 根据梯度稀释的标准组值-空白组值数据绘制标准曲线：Y=a X+ b(Y为标准组值-空白组值；X为标准品MDA浓度；a为标准曲线斜率；b为标准曲线截距)；

3.1.2. 血清血浆样品MDA浓度计算：

单位样品MDA（μmoL/L）=[（样品组值-空白组值）-b]/a×样品稀释倍数

3.1.3. 组织、细胞样品MDA浓度计算：

单位样品MDA（μmol/gprot）=[（样品组值-空白组值）-b]/a×样品稀释倍数/样品蛋白浓度（gprot/L）

3.2. 标准品换算法：

3.2.1. 单位血清血浆样品MDA浓度计算：

单位样品MDA（μmol/L）=（样品组值-空白组值）/（标准组值-空白组值）×标准品MDA浓度（μmol/L）×样品稀释倍数

3.2.2. 组织、细胞样品MDA浓度计算：

单位样品MDA（μmol/gprot）=（样品组值-空白组值）/（标准组值-空白组值）×标准品MDA浓度（μmol/L）×样品稀释倍数/组织或细胞蛋白浓度（gprot/L）

样品准备：

1. 血浆、血清样品：可直接用于MDA检测；

2. 组织样品：使用合适的缓冲液（PBS、生理盐水等）或IP裂解液（推荐G2038）进行匀浆裂解，其中组织和试剂的比例为1比10即可(g:mL)；匀浆裂解后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续MDA检测；

3. 细胞样品：细胞收集后，可使用合适的缓冲液或IP裂解液重悬细胞，大约每1 X 10^7个细胞加100-200 μL 试剂，对其进行超声或冰上裂解；处理后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续MDA检测；

仅供科研用途，不可用于临床诊断！

仅供科研用途，不可用于临床诊断！