| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
|---|---|---|
| 过氧化氢酶 CAT | BKM-6934 | （组织样本匀浆（ELISA））样 |
实验图：
服务介绍：
过氧化氢酶(CAT)，是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物体内。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶, 约占过氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格（元） |
| GM1136 | 过氧化氢酶 CAT | 反应 | 10 |
实验结果展示：
1、过氧化氢酶 CAT
实验流程：
1. 检测准备工作：
1.1. 过氧化氢标准品配制：根据需要，使用超纯水将过氧化氢标准品（9.9 mol/L）进行梯度稀释（例如稀释至120/60/30/15/7.5/3.75/0 mM），与待测样品进行后续检测后，用于标准曲线法数据分析；
1.2. 显色工作液配制：显色剂：澄清剂=10：1配制成显色工作液（现配现用）。
注意：澄清剂低温会凝固，37℃水浴溶解即可；显色剂存放过程中析出属于正常现象，75℃左右水浴复溶后不影响使用效果。
2. CAT检测：
2.1. 根据下表操作进行CAT检测：
标准孔 | 测定孔 | 对照孔 | |
不同浓度标准品 | 10 μL | ||
样本 | 10 μL | ||
CAT检测缓冲液 | 100 μL | 100 μL | 100 μL |
37℃孵育5分钟 | |||
超纯水 | 10 μL | ||
CAT检测底物底物 | 10 μL | 10 μL | |
37℃精确反应1分钟 | |||
显色工作液 | 110 μL | 110 μL | 110 μL |
样本 | 10 μL | ||
静置10分钟，酶标仪405 nm测OD值 | |||
3. 数据分析
数据分析前，需计算待测组织或细胞样品蛋白浓度。可通过BCA蛋白定量检测试剂盒（G2026）对待测样品进行蛋白浓度检测（1 mmol/L=1 μmol/mL）。
定义：37℃条件下，每毫升血清血浆或每毫克组织蛋白，每分钟分解1 μmol的H2O2为一个活力单位；
3.1. 根据梯度稀释的标准组值-空白组值（0 mM标准品组数值）数据绘制标准曲线：
Y=a X+ b(Y为标准组OD值；X为标准品过氧化氢浓度；a为标准曲线斜率；b为标准曲线截距)；
3.2. 血清血浆样品CAT活力计算：
单位样品CAT活力（U/mL）=[(对照组OD值-测定组OD值)-b]/a×0.01mL（底物体积）/1（min，反应时间）/0.01mL（样本体积）×样品稀释倍数
3.3. 组织、细胞样品CAT活力计算：
单位样品CAT活力（U/mgprot）=[(对照组OD值-测定组OD值)-b]/a×0.01mL（底物体积）/1（min，反应时间）/0.01mL（样本体积）×样品稀释倍数/样品蛋白浓度（mgprot/mL）
样品准备：
1. 血浆、血清样品：可直接用于CAT活力检测；
2. 组织样品：使用合适的缓冲液（PBS、生理盐水等）进行匀浆裂解，组织和试剂的比例为1：9（0.1 g：0.9 mL）即可；匀浆后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续CAT检测；
3. 细胞样品：细胞离心后，使用合适的缓冲液重悬细胞，大约每1~2 × 106个细胞加500 μL PBS，匀浆；匀浆后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续CAT检测；
仅供科研用途，不可用于临床诊断！
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