产品信息

产品简介

本产品SweScript Reverse Transcriptase II是基于第一代SweScript Reverse Transcriptase I逆转录酶通过体外改造筛选获得的逆转录酶突变体。其同样无RNase H活性，避免了第一链cDNA合成反应中DNA/RNA杂交体模板中RNA被降解，从而保证第一链cDNA合成量和长度；与野生型酶及第一代SweScript Reverse Transcriptase I相比，第二代SweScript Reverse Transcriptase II的热稳定性和合成效率进一步提高，可在42-65℃范围内高效合成cDNA，并且最快5 min可完成逆转录反应，特别适用于复杂结构的RNA逆转录。

来源：来源于M-MLV（莫洛尼鼠白血病病毒），由大肠杆菌重组表达；

酶活定义：在37℃条件下，10 min内，以Poly(rA)·Oligo (dT)为模板/引物，掺入1 nmol的dTTP为酸不溶性物质所需的酶量定义为一个酶活单位（U）；

纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95%；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；200 U/μL。

酶存储buffer：20mM Tris-HCl，100mM KCl，0.1mM EDTA，1mM DTT，0.5% Tween 20，0.5% NP-40，50% Glycerol，pH 8.0；

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。

组成

操作步骤

第一链cDNA合成步骤

1. 配置逆转录反应体系（推荐20 μL反应体系）：

注：针对高GC或复杂模板，可预先混合RNA模板、逆转录引物、无核酸酶水并在65℃保温5 min后，迅速至于冰上冷却。然后再加入其他反应组分。

2. 轻轻混匀并离心；

3. 逆转录程序设置：

a：如选择使用Random Hexamer Primer，25℃孵育5 min后，再进行后续反应；如选择使用Oligo (dT) 18 Primer或Gene Specific Primer，可直接进行55℃反应；

b：对于高GC或复杂模板，可将逆转录温度提高至65℃。

注意事项

1. RNA容易被降解，规范操作避免RNase污染；

2. 逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融；

3. 如模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT) 18 Primer，与真核生物mRNA的3' Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA；

4. 原核生物RNA逆转录请选用Random Hexamer Primer或Gene Specific Primer；

5. 如逆转录后续为qPCR实验，可将Oligo (dT) 18 Primer与Random Hexamer Primer混合使用，可使mRNA的各个区域cDNA合成效率相同，有助于提高定量结果的真实性和重复性；

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）