产品信息

产品简介

表观遗传学是研究在基因的核苷酸序列不发生改变的情况下，基因的表达和调控的可遗传变化的一门遗传学分支学科。其中DNA甲基化是被最早发现，也是研究最为深入的表观遗传调控机制之一。在许多动植物中，DNA甲基化是以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，在甲基转移酶的催化下，胞嘧啶嘧啶环的第五个碳位置共价结合一个甲基基团。

在原核生物和真核生物中DNA甲基化是一种自然发生的事件。在原核生物中，DNA甲基化可保护宿主DNA不被限制性内切酶消化，而这些限制性内切酶可以消除外源DNA；在高等真核生物中，DNA甲基化在基因表达的调控中发挥重要作用。

本产品是利用亚硫酸氢盐处理甲基化的DNA，将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，整个过程可在4 h内完成，转化效率可达99%以上。同时本产品采用于磁珠上脱硫并回收DNA的方法，有效提高转化后的DNA的回收量，整个操作流程极为简便。经转化后的DNA可用于PCR扩增和下游分析实验，包括限制性内切酶酶切、测序、微阵列等。

储存与运输

室温运输及储存；有效期12个月。

试剂盒组成

使用前准备

1. CT Conversion Reagent使用前先加入280 μL Buffer BM和910 μL Nuclease-free Water，涡旋至溶解，-20℃保存。

2. 使用前请向Buffer DB加入8.4 mL无水乙醇，Buffer PW加入56 mL无水乙醇，混匀后使用。

3. 自备磁力架，异丙醇。

操作步骤

1. 取20 μL基因组DNA（总量为500 ng-2000 ng，如果体积不足20 μL可用Nuclease-free Water补足）置于PCR管内，加入130 μL CT Conversion Reagent，使用移液器轻轻吹打混匀；

2. 将第一步的混合物转移至PCR仪中，设置98℃ 10 min，64℃ 2.5 h，运行结束后产物置于4℃保存；

3. 向上述产物中加入150 μL Buffer GB和130 μL异丙醇，使用移液器吹打混匀，再加入15 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需涡旋至分散均匀），使用移液器吹打至磁珠分散均匀；

4. 室温放置10 min，期间使用移液器吹打混匀3-4次，使磁珠保持分散均匀状态；

5. 将离心管移至磁力架上静置30 s，使磁珠吸附至管壁，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）；

6. 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入400 μL Buffer PW，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，再将离心管移至磁力架上静置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）；

7. 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入200 μL Buffer DB，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，室温放置15 min，期间每隔3-5 min吹打混匀一次（Buffer DB处理时间不应过长，以免造成基因组DNA过度碎片化），将离心管移至磁力架上静置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）；

8. 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入400 μL Buffer PW，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，再将离心管移至磁力架上静置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）；

9. 重复步骤8；

10. 将离心管盖打开，室温放置5–10 min或65℃放置3–5 min，使乙醇完全挥发（请勿使磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）；

11. 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入30-50 μL Nuclease-free Water，使用移液枪将磁珠吹打至磁珠分散均匀，室温静置5 min；

12. 将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的离心管中，即得转化后的DNA溶液。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 磁珠易沉淀，使用前应摇匀或涡旋均匀。

3. Buffer DB处理时间不能过长，容易造成DNA过度碎片化，影响后续实验。

4. 磁珠洗脱前应彻底去除乙醇，避免残留乙醇影响DNA洗脱效率和下游实验。

5. 请勿长时间干燥磁珠，以免引起不可逆的磁珠聚集。

6. 回收后的DNA请于-20℃保存，避免反复冻融。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图