产品信息

产品简介

表观遗传学是研究在核苷酸序列不发生改变的情况下，基因的表达和调控可遗传变化的一门遗传学分支学科。其中DNA甲基化是最早被发现，也是研究最为深入的表观遗传调控机制之一。

亚硫酸氢盐转化反应是研究基因组DNA甲基化模式的一种常用技术。本产品将亚硫酸氢盐转化反应与新型硅胶膜技术结合，将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，转化效率可达99%以上。经转化后的DNA可用于下游分析实验，包括PCR扩增、限制性内切酶酶切、测序、微阵列等。

储存与运输

Buffer BP冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

试剂盒组成

使用前准备

1. CT Conversion Reagent使用前先加入280 μL Buffer BM、350 μL Buffer BP和560 μL Nuclease-free Water，涡旋至溶解，-20℃保存。

2. Buffer GB使用前加入12 mL异丙醇，混匀后使用。

3. Buffer DB使用前加入24 mL无水乙醇，Buffer PW使用前加入80 mL无水乙醇，混匀后使用。

操作步骤

1. 柱平衡：将DNA Spin Column置于Collection Tube，向吸附柱中加入500 μL Buffer BL，12,000 rpm离心1 min，去除Collection Tube中的废液，将DNA Spin Column重新放回Collection Tube中（处理过的DNA Spin Column当天使用）；

2. 在200 μL离心管中配制亚硫酸氢盐转化体系：取20 μL基因组DNA（总量为500 ng-2000 ng，如果不足20 μL可用Nuclease-free Water补足），加130 μL CT Conversion Reagent，使用移液器轻轻吹打混匀；

3. 将反应体系转移至热循环仪中，98℃孵育10 min，64℃孵育2.5 h，4℃保存（可选）；

4. 反应结束后短暂离心，收集管壁溶液于管底，将反应液转移至1.5 mL离心管中；

5. 加入600 μL Buffer GB（确认是否加异丙醇），使用移液器吹打混匀；

6. 将上一步所得溶液转移到DNA Spin Column中12,000 rpm离心1 min，弃掉Collection Tube中液体，将DNA Spin Column放入Collection Tube中；

7. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer PW（确认是否加无水乙醇）12,000 rpm离心1 min，弃掉Collection Tube中液体，将DNA Spin Column放入Collection Tube中；

8. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer DB（确认是否加无水乙醇），室温放置15 min，12,000 rpm离心1 min弃掉Collection Tube中液体，将DNA Spin Column放入Collection Tube中；

9. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer PW（请沿管壁加入Buffer PW，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12,000 rpm离心1 min，弃掉Collection Tube中液体，将DNA Spin Column放入Collection Tube中；

10. 重复步骤9；

11. 12,000 rpm离心2 min，将DNA Spin Column放入一新的的1.5 mL离心管中；

12. 将DNA Spin Column管盖打开，室温放置5–10 min，使乙醇完全挥发；

13. 向DNA Spin Column中加入20 μL Nuclease-free Water，室温静置2 min；

14. 12,000 rpm离心2 min即得到转化后DNA。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 柱平衡步骤中Buffer BL的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温、潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。

3. Buffer DB处理时间不能过长，容易造成DNA过度碎片化，影响后续实验。

4. 回收后的DNA如果当天使用请于2-8℃保存，如果不能及时使用，请于-20℃保存。

5. 在后续的PCR扩增反应中，建议20 μL体系加入2-3 μL产物作为模板。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附操作流程简图