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DiI细胞膜红色荧光染色试剂盒
BKM-0263
百科盟

产品信息

产品名称 产品编号 规格
DiI细胞膜红色荧光染色试剂盒 BKM-0263 (DiI红色)100-1000 T

产品简介

产品信息

产品名称

产品编号

规格

DiI细胞膜红色荧光染色试剂盒

G1705

100-1000T


产品描述

DiI,又称 DiIC18(3),中文全称1,1`-双十八烷基-3,3,3`,3`-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐,分子量933.87,是一类具有亲脂性的长链二烷基碳菁类染料荧光染料,常用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。DiI进入细胞膜后可以侧向扩散,逐渐使整个细胞膜被染色。DiI在进入细胞膜之前荧光较弱,当与细胞结合后荧光强度会大大增强,被激发后可以发出橙红色荧光,并可以用标准的TRITC滤光片检测。Dil最大激发波长为550 nm,最大发射波长为564 nm。根据DiI的特性,其可以用于活细胞以及固定细胞的成像检测。此外DiI探针一般不影响细胞的生存能力,故可正向或逆向的标记细胞或某些物质(外泌体)用作示踪检测。

本产品Dil细胞膜红色荧光染色试剂盒,包含Dil荧光探针及优化的染色缓冲液,使细胞膜染色更加快速、荧光更加明亮稳定、效果更好。


储存与运输

干冰运输;-20℃避光保存,探针避免反复冻融,有效期6个月。


试剂盒组成

Component Number

Component

G1705

G1705-1

DiI细胞膜红色荧光探针

400 μL

G1705-2

DiI细胞膜标记缓冲液

100 mL

说明书

1份


操作步骤

1. DiI染色工作液配制

1.1. 将DiI细胞膜红色荧光探针染色缓冲液以1:250比例混合稀释,配制成DiI染色工作液(现配现用);注意,DiI探针稀释比可根据具体情况在1:250-1:500进行调整,以获得最佳染色效果。

2. 悬浮活细胞染色:

2.1. 收集悬浮细胞,以500-1000 g室温离心3-5 min,去除细胞上清;

2.2. 使用Dil染色工作液重悬细胞,使细胞密度在1-2×106个/mL;

2.3. 置于37℃避光孵育5-20 min;建议根据具体细胞调整染色时间,以获得最佳染色效果;

2.4. 孵育结束后,500-1000 g室温离心3-5 min,吸除Dil染色工作液;

2.5. 用37℃预热的PBS或细胞培养基重悬细胞,500-1000 g离心3-5 min,去除上清;

2.6. 重复2.5步骤一次;

2.7. 流式细胞仪上机检测,或将细胞转移至多孔板、细胞培养皿或者载玻片上,在荧光显微镜下观察。Dil最大激发波长550nm,最大发射波长564nm。

3. 贴壁活细胞染色(6孔板为例):

3.1. 将细胞提前以一定密度种植于6孔板中;

3.2. 吸除细胞培养基,用PBS(G4202)洗涤细胞2次。加入1 mL Dil染色工作液(其他规格孔板,视情况调整,保证染料覆盖细胞);

3.3. 置于37℃避光孵育5-20 min,吸除Dil染色工作液。建议根据具体细胞调整染色时间,以获得最佳染色效果;

3.4. 用37℃预热的PBS或细胞培养基,洗涤细胞1-2次;

加入37℃预热的PBS或细胞培养基,荧光显微镜下观察。Dil最大激发波长550nm,最大发射波长564nm。

4. 固定的贴壁细胞染色:

4.1. 样本前处理:

对于细胞:去除细胞培养基,PBS洗涤1-2次。加入4%多聚甲醛固定液(G1101),室温固定 10 min。吸除固定液,用PBS洗涤2-3次;

4.2. 加入0.1-0.5% Triton-100(PBS配制)处理细胞,室温通透10 min;吸除通透液,用PBS洗涤2-3次;

4.3. (可选,免疫荧光标记)按照免疫荧光染色的方法进行抗体的孵育或其他染料进行染色。注意抗体孵育过程中的封闭液、抗体稀释液、洗涤液等不能含有去垢剂;

4.4. 加入适量体积的Dil染色工作液覆盖细胞,37℃避光孵育5-20 min,吸除Dil染色工作液。建议根据具体细胞样本调整染色时间,以获得最佳染色效果;

4.5. 细胞经PBS洗涤2-3次,然后置于荧光显微镜观察(细胞需以适量PBS覆盖)。Dil最大激发波长550nm,最大发射波长564nm。

5. 外泌体荧光标记:

5.1. 将提取的外泌体沉淀,用适量Dil染色工作液重悬;

5.2. 将样品置于37℃避光孵育30 min;

5.3. 用10倍体积PBS稀释样品体积(可选);

5.4. 按照之前提取获得外泌体的方案,再一次提外泌体,以去除多余的染料;

5.5. 收集的外泌体沉淀,用PBS重悬,得到Dil标记的外泌体。可用于相应的后续实验,例如细胞摄取。



注意事项

1. 荧光染料均存在淬灭问题,请注意避光以减缓荧光猝灭。

2. 探针亲脂性的特点,实验过程中请避免使用含有甘油或其它有机物的试剂,否则会影响染色效果。

3. 当需要固定操作时,样品宜在4%多聚甲醛中进行固定,其他不适当的固定液会导致荧光背景高。

4. 由于细胞间敏感性和实验目的的不同,探针的稀释比和孵育时间需根据实际情况适当调整。

5. 为了您的健康和安全,操作时请穿好实验服、戴好手套。


本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!


货号

名称

标记物

特点

染色后固定

染色后破膜

染色前固定

细胞毒性

染色稳定性(活细胞)

G1127-1ML

Hoechst 33342染色液(1 mg/mL)

细胞核

适用于活细胞&固定细胞的染色,染色后可以固定可以破膜。无细胞毒性。
Hoechst 33342的细胞膜透性比Hoechst 33258更好。
Hoechst 33258的水溶性比Hoechst 33342更好。

可以

可以

可以

——

G1011-10ML

Hoechst 33258染液(即用型)

细胞核

可以

可以

可以

——

G1012-10ML

DAPI染色试剂(即用型)

细胞核

适用于活细胞&固定细胞的染色,染色后可以固定可以破膜。无细胞毒性

可以

可以

可以

——

G1012-100ML

细胞核

G1021-10ML

PI染液

细胞核

需要固定后再染色。适用于细胞,酵母,G+及G-细菌

不可以

不可以

可以

有一定毒性

——

G1248-100T

IF488-鬼笔环肽

细胞骨架

需要固定后染色。适用于细胞,酵母,G+及G-细菌

不可以

不可以

必需固定

——

G1249-100T

IF555-鬼笔环肽

细胞骨架

需要固定后染色。适用于细胞,酵母,G+及G-细菌

不可以

不可以

必需固定

——

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JC-1线粒体膜电位检测试剂盒

线粒体

只能染活细胞,可以反应线粒体膜电位的变化。正常细胞呈现胞质绿色荧光,线粒体极化的细胞呈现胞质红色荧光

不可以

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