产品信息

产品描述

细胞内pH值对许多细胞活动起着重要作用，例如细胞生长，酶活性，离子运输等过程。BCECF, AM是一种可渗透细胞的pH荧光染料，通过对比双激发波长的比率广泛用于监测细胞内pH值的变化。BCECF, AM本身并无荧光，进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切成BCECF，从而被滞留在细胞内。BCECF, AM不仅被广泛用于哺乳动物细胞的研究，也有报道用于动物组织，植物细胞，细菌和酵母等的细胞内pH水平检测。

本试剂盒基于上述检测原理，以BCECF, AM为主体，并提供专门的配套缓冲液，使用方便，检测更灵敏。可用荧光显微镜、酶标仪等对应的仪器来监测细胞内pH的动态变化。

储存与运输

干冰运输；-20℃避光干燥保存，12个月有效。

试剂盒组成

注意：以上试剂盒反应次数对应96孔板检测体系。

操作步骤

1. 实验前准备工作：将细胞以一定密度提前接种于96孔板中，并根据实验目的对细胞进行相应的前处理；

2. BCECF, AM检测工作液配置：根据需要配置BCECF, AM检测工作液，配置体系可参考下表，注意不同细胞特性不同，实验时可根据实际情况添加或减少探针的使用浓度，初次建议稀释比在1:500；

3. 染色标记（以贴壁细胞为例；悬浮细胞需每次离心换液）：

3.1. 去除原有细胞培养基，并使用PBS或其他缓冲液洗涤细胞1-2次；

3.2. 去除洗涤缓冲液，向每孔加入100 μL BCECF, AM检测工作液，避光于37℃细胞培养箱中孵育30 min；

3.3. 孵育结束去除BCECF, AM检测工作液，使用PBS或其他缓冲液洗涤细胞2-3次；

注意：要将BCECF, AM检测工作液清洗干净。

3.4. 加入100 μL缓冲液，进行荧光检测。

4. pH校准（以nigericin法校准pH为例，可选）：

4.1. 提前配置不同pH的缓冲液（例如：6.6、7.0、7.2、7.4、7.8、8.2）；

4.2. 染色标记后，分别加入不同pH的缓冲液以及nigericin（终浓度10μg/mL），避光于37℃细胞培养箱中孵育10 min后，测量荧光强度；

4.3. 绘制荧光强度与pH图表，用于样品pH计算;

注意：nigericin法校准pH仅供参考，可根据实验需求，自行选择对应方式。一般情况下，荧光强度比率越高，pH越高。

5. 荧光检测：使用酶标仪等相关仪器对细胞内pH水平进行检测分析。通常BCECF, AM应用到的双激发比率为：EX/EM=490/530 nm : EX/EM=440/530 nm。

注意事项

1. 由于不同细胞间性质以及前处理方式不同，步骤中描述的使用探针比例以及孵育时间范围仅供参考，可根据具体情况进行调整。

2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光操作，以减缓荧光猝灭。

3. BCECF, AM对湿度非常敏感，首次使用时，请根据实验安排适当分装，避免反复冻融。BCECF,AM检测工作液请现配现用。

4. 使用前充分震荡以确保其完全溶解。

5. 基于本探针的工作原理，不能对细胞进行固定或穿孔处理。

6. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）