产品信息

产品描述

FerroOrange又称RhoNox-4，可特异性检测细胞内游离亚铁（II）离子（Fe²⁺）。试剂盒基本原理是，FerroOrange与亚铁离子反应后，不可逆的生成一种橙色荧光产物，其荧光强度与细胞内亚铁离子含量成正比。而铁（III）离子（Fe³⁺）或铁以外的二价金属离子都不会增加其荧光强度。FerroOrange对细胞膜的渗透性很强，快速反应后仍能保持在细胞内，因此适用于活细胞成像。

本试剂盒基于上述检测原理，以FerroOrange为主体，并提供专门的配套缓冲液与阳性诱导剂，可用荧光显微镜、酶标仪等对应的仪器对活细胞内的亚铁离子进行检测，使用方便，检测灵敏。

储存与运输

干冰运输；-80℃避光干燥保存，6个月有效。

试剂盒组成

注意：以上试剂盒反应次数对应96孔板检测体系。

操作步骤

1. 实验前准备工作：将细胞以一定密度提前接种于96孔板中，并根据实验目的对细胞进行相应的前处理；

2. FerroOrange检测工作液配制：根据需要配制FerroOrange检测工作液，配制体系可参考下表，注意不同细胞特性不同，实验时可根据实际情况添加或减少探针和阳性诱导剂的使用浓度，初次建议稀释比在1:500；配制前请将FerroOrange荧光探针短暂涡旋并离心，确保试剂全部沉在管底；

3. 染色标记（以贴壁细胞为例；悬浮细胞需每次离心换液）：

3.1. 去除原有细胞培养基，并使用HBSS或其他缓冲液洗涤细胞1-2次；

3.2. 参考上述表格对细胞进行染色处理，避光于37℃细胞培养箱中孵育30 min；

3.3. 孵育结束去除FerroOrange检测工作液，使用HBSS或其他缓冲液洗涤细胞1-2次；

3.4. 加入100 μL缓冲液，进行荧光检测；

4. 荧光检测：使用荧光显微镜、酶标仪等仪器对细胞内亚铁离子水平进行检测分析。FerroOrange为橙色荧光，EX/EM≈543 nm/580 nm。使用阳性诱导剂处理的阳性对照组荧光强度应弱于实验组。

注意事项

1. 由于不同细胞间性质以及前处理方式不同，步骤中描述的使用探针比例以及孵育时间范围仅供参考，可根据具体情况进行调整。

2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光操作，以减缓荧光猝灭。

3. FerroOrange对湿度非常敏感，首次使用时，请根据实验安排适当分装。FerroOrange检测工作液需现配现用。

4. FerroOrange只能检测游离二价铁，无法检测结合铁。

5. FerroOrange与Fe²⁺反应后的荧光强度上升不可逆，不可用于实时动态监测亚铁离子水平。

6. 基于本探针的工作原理，不能对细胞进行固定或穿孔等处理。

7. 解冻后有部分沉淀析出，属于正常现象，使用前充分震荡以确保其完全溶解。

8. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。

（产品包装升级中，以实物为准。）