| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
|---|---|---|
| T5 Exonuclease | BKM-0585 | 1000 U |
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
T5 Exonuclease | G3463-1000U | 1000 U |
产品简介
T5 Exonuclease即T5核酸外切酶，来源于T5噬菌体D15基因由大肠杆菌重组表达，是一种按照5'→3'方向降解双链或单链DNA的核酸外切酶。T5 Exonuclease可以从线性或环状双链DNA的末端、缺口(gap)或缺刻(nick)处起始消化但无法降解超螺旋双链DNA。主要用于Gibson组装或其他无缝克隆、降解线性和缺刻质粒DNA等。
来源：来源于T5噬菌体，由大肠杆菌重组表达。
酶活定义：在37℃、50 μL反应体积条件下，30 min内从双链DNA水解产生1 nmol酸溶性脱氧核糖核苷酸所需的酶量定义为一个灭活单位。
纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95%；10 U/μL。
失活或抑制： EDTA终浓度大于11 mM可以使酶失活。
酶存储buffer：50 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1mM DTT，0.1 EDTA，50%Glycerol，0.1%Triton X-100，pH7.5。
10х T5 Reaction buffer：500 mM Potassium Acetate，200mM Tris-acetate，100 mM Magnesium Acetate，1 mM DTT，pH 7.9。
图1. T5 Exonuclease消化线性dsDNA效果图。 在50 μL反应体系（50 mM Potassium acetate, 20 mM Tris-acetate, 10 mM Magnesium acetate,1 mM DTT, pH 7.9）中，加入1 μg 300 bp的DNA片段以及图中标注量的T5 Exonuclease，37℃孵育10 min后，立即冰浴，并加入终浓度11 mM EDTA终止反应。取10 μL反应产物进行凝胶电泳检测。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。
组成
Component Number | Component | G3463 |
G3463-1 | T5 Exonuclease | 100 μL |
G3463-2 | 10х T5 Reaction buffer | 1 mL |
说明书 | 1份 | |
操作步骤
1. 按照下表配置反应体系：
Component | Volume |
DNA样品 | ≤1 μg |
Nuclease-Free water | To 50 μL |
10х T5 Reaction buffer | 5 μL |
T5 Exonuclease | 1 μL |
2. 配置好反应体系后充分混匀，于37℃孵育10-30 min；
3. 反应完成后立即冰浴并加入EDTA至终浓度为11 mM，终止反应。
注意事项
1. T5 Exonuclease对DNA底物具有一定的选择性，其对不同的DNA底物显示出不同的反应活性。因此，需要适当控制好酶量和反应时间。
2. T5 Exonuclease在50℃也具有一定的活性，因此可用于Ginson组装。
3. 酶的取用都应放在冰盒内，使用完毕后立即存储于-20℃。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
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